植物蛋白互作验证利器 BiFC/LCI

双分子荧光互补 (Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)是一项可直观、快速判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术。

将蛋白在某些特定的位点切开，形成不发荧光的N和C端2个多肽，称为N片段(N-fragment)和C片段(C-fragment)。这2个片段在细胞内共表达或体外混合时，不能自发地组装成完整的荧光蛋白，在该荧光蛋白的激发光激发时不能产生荧光。但是，当这2个荧光蛋白的片段分别连接到1组有相互作用的目标蛋白上，如果目标蛋白质之间有相互作用，则在激发光的激发下，产生该荧光蛋白的荧光。反之，若蛋白质之间没有相互作用，则不能被激发产生荧光。

技术原理

萤火虫荧光素酶片段互补图像技术（LCI）是近年来形成的研究蛋白互作的新技术，把2个目标蛋白分别连接于萤火虫荧光素酶的C端和N端。如果2个蛋白互作，N段和C端接近形成有活性的荧光素酶。基于烟草瞬时表达的LCI技术将LCI技术与烟草瞬时表达相结合，在研究植物蛋白的相互作用中，可以实现活体细胞内实时、定量分析；不受植物自发荧光的干扰；而且操作简单，不需要裂解细胞提取蛋白质，可以很好的反映植物生理条件下蛋白的互作状态。

服务流程

1、构建相关载体；

2、转化农杆菌；

3、转化烟草叶片；

4、观察和整理数据。

交付数据及材料

1、完整的实验报告，包括原始数据、详细的实验步骤及整理结果。

2、构建好的质粒及农杆菌。

LB985是第一个用于植物研究的专业级活体分子成像系统。它的核心部件是 一个超灵敏的-90摄氏度，冷CCD相机。相机可以安装在设备顶部或在侧面，可以在完全 避光的暗箱内从顶部或侧面捕捉整体植物的光学信号。

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